經(jīng)驗(yàn)總結(jié)一：液質(zhì)使用經(jīng)驗(yàn)與禁忌

 

1、酸性物質(zhì)適合做負(fù)離子檢測(cè)，所以流動(dòng)相偏堿性較合適，促使其解離，堿性物質(zhì)適合做正離子檢測(cè)，流動(dòng)相中適當(dāng)?shù)募尤胨幔偈蛊湫纬烧x子，流動(dòng)相中適當(dāng)加一些醋酸鈉（或者醋酸銨），可形成加鈉的正離子或者加銨的正離子。

 

 

液質(zhì)分析中推薦使用的流動(dòng)相和添加劑

 

 

2、糖苷類的物質(zhì)在做FAB和esi（＋）時(shí)，[M+Na]峰往往比[M+H]峰要強(qiáng)，此為經(jīng)驗(yàn)，原因只是推測(cè)可能和天然產(chǎn)物的提取過(guò)程有關(guān)；鹽類化合物如鹽酸鹽、硫酸鹽在質(zhì)譜中酸的部分一般不會(huì)出現(xiàn)；二羧酸鹽（esi負(fù)離子模式）除了分子離子峰外，會(huì)出現(xiàn)連續(xù)掉44的兩個(gè)峰，為失去羧酸根的離子，這三個(gè)峰非常特征，但是會(huì)受錐孔電壓的影響，調(diào)低電壓譜圖會(huì)更漂亮。

 

3、胺類物質(zhì)做esi質(zhì)譜時(shí)要注意進(jìn)樣量要少，因?yàn)楹苋菀纂x子化，不易沖洗干凈，會(huì)影響后面樣品的測(cè)定。像三乙胺在液質(zhì)聯(lián)用時(shí)不能用于調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值。若不慎引入三乙胺，在正離子檢測(cè)時(shí)總會(huì)出現(xiàn)很強(qiáng)的102峰（三乙胺的[M+H]）.

 

4、質(zhì)譜用水一般用娃哈哈純凈水之類的就很好；質(zhì)譜用甲醇和乙腈，換用了很多品牌，發(fā)現(xiàn)Merck的還是稍微好一些；Finnigan用的氮?dú)獠灰欢ㄒ玫揭旱?，用普通的鋼瓶氣就可以了，可能還省錢(qián)些；建議大家買(mǎi)一個(gè)好一點(diǎn)的手電筒和一個(gè)放大鏡，手電筒用來(lái)看源里面，放大鏡看你割的毛細(xì)管平整。

 

5、質(zhì)譜的基線其實(shí)跟液相的紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器一樣，基線高的原因不外乎內(nèi)部和外部的原因。

1）你選擇的流動(dòng)相在質(zhì)譜的響應(yīng)比較高，比如水相比較多的時(shí)候，噪音比較大些；還有如果鹽含量比較大的時(shí)候，噪音更大些。
2）檢測(cè)器的靈敏度越高的時(shí)候，噪音應(yīng)該越高。如果質(zhì)譜的污染比較嚴(yán)重時(shí)，基線肯定比較高。比如離子阱檢測(cè)器，用得久了，阱中的離子就會(huì)增多，一方面降低了質(zhì)譜的靈敏度，另一方面增加了基線噪音。
3）質(zhì)譜的基線很多時(shí)候還跟你選擇的離子寬度有關(guān)。比如你作選擇離子掃描的時(shí)候，基線就低些。你作選擇反應(yīng)掃描的時(shí)候，離子寬度不要選得太寬，太寬噪音就高些。
4）多級(jí)質(zhì)譜一般做二級(jí)或三級(jí)質(zhì)譜，基線噪音就低很多。

 

6、質(zhì)譜維護(hù)經(jīng)驗(yàn)交流：做樣前－檢查氮?dú)猓鲃?dòng)相，質(zhì)譜儀的真空度，毛細(xì)管溫度…
1）最好不用直接進(jìn)樣（容易污染離子源）；
2）做聯(lián)用時(shí)最好分流（a可以使用常規(guī)柱，b縮短分析時(shí)間，c 延長(zhǎng)質(zhì)量分析器壽命）；
3）最好使用在線切換閥，降前每個(gè)樣品的前后1－2分鐘的流動(dòng)相切入廢液（避免樣品中的鹽進(jìn)入質(zhì)譜，做Sequence時(shí)可以把平衡柱子的流動(dòng)相切入廢液）；
4）開(kāi)始聯(lián)用前，直接運(yùn)行質(zhì)譜數(shù)分鐘，可以先將溫度（毛細(xì)管溫度和離子源溫度（APCI））加熱到預(yù)設(shè)定值（如果是APCI源還可以避免將燒掉heater，太貴了，最好別燒）；
5）待機(jī)時(shí)將切換閥置于waste，避免剛開(kāi)液相時(shí)將流動(dòng)相打入離子源；
6）關(guān)機(jī)前毛細(xì)管的溫度先降下來(lái)，穩(wěn)定一段時(shí)間后再關(guān)閉電源，避免風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動(dòng)后毛細(xì)管外圍的熱量向里擴(kuò)散，容易引起內(nèi)部線路及電子元器件老化加速；
7）每天清理毛細(xì)管口外部，擦洗干凈，每次停機(jī)時(shí)注意清洗Skimmer，用無(wú)塵擦拭紙，kimberly那種；
8）如果用的是鋼瓶而且天天做樣的話，將兩個(gè)鋼瓶并聯(lián)，當(dāng)然，一月不做一次的話就算了；
9）做定量時(shí)注意離子源噴針的具體位置，否則標(biāo)準(zhǔn)曲線就不能用了；
10）不要不經(jīng)過(guò)柱子分離進(jìn)行定量分析，結(jié)果不可靠（競(jìng)爭(zhēng)性抑制目標(biāo)分子離子化）；
11）如果是負(fù)離子檢測(cè)的話，可以相流動(dòng)相中加入少量異丙醇；
12）不要使用不揮發(fā)性鹽，如果使用揮發(fā)性鹽，但濃度不要超過(guò)20mmol/l；
13）需要使用酸的情況下可以用甲酸，乙酸，三氟乙酸可以用，但能用甲酸或乙酸時(shí)就別用TFA；

 

7、理論上液質(zhì)聯(lián)用禁止使用任何不揮發(fā)性的緩沖鹽，如果需要盡量使用諸如乙酸氨等揮發(fā)性鹽，濃度不要超過(guò)20mmol/l.

對(duì)于不揮發(fā)性的緩沖鹽，如果你的儀器有吹掃捕集的話也可使用，但一定要小心。萬(wàn)不得已也不要用，首先有不揮發(fā)鹽是得不到好的離子流的，其次鹽留在質(zhì)譜中很難除掉，除非停機(jī)清洗，不然一直會(huì)影響其他樣品的分析。

可以找質(zhì)譜友好的條件來(lái)做液質(zhì)聯(lián)機(jī)，例如色譜條件為20mM磷酸鹽的水/乙腈流動(dòng)相，做液質(zhì)聯(lián)機(jī)的時(shí)候就可以用醋酸銨代替，然后用醋酸調(diào)節(jié)pH值與磷酸鹽的一致即可。

除了難揮發(fā)的鹽，三乙胺、表面活性劑、還有高濃度（>0.5%）的TFA，都對(duì)質(zhì)譜不好，液質(zhì)聯(lián)用的流動(dòng)相中應(yīng)該避免。

 

 

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)二：（質(zhì)量定量分析經(jīng)驗(yàn)）

 

1、要用目標(biāo)離子的碎片定量，特征性強(qiáng)，排除干擾；

 

2、在定量分析的方法設(shè)置上，盡可能提高掃描速率，提高準(zhǔn)確率和重復(fù)性（可以通過(guò)a減小掃描質(zhì)量數(shù)的范圍來(lái)提高目標(biāo)峰的掃描次數(shù)，或 將一個(gè)樣品全部分析時(shí)間斷分成n個(gè)segments，對(duì)目標(biāo)離子單獨(dú)設(shè)置掃描模式）；

 

3、一定要通過(guò)色譜柱分離后定量分析，避免競(jìng)爭(zhēng)性離子的存在影響目標(biāo)離子的離子化效率；如果目標(biāo)分子未與競(jìng)爭(zhēng)性分子完全分開(kāi)，則在離子化過(guò)程中導(dǎo)致目標(biāo)分子的離子化效率降低，導(dǎo)致樣品分子的定量結(jié)果偏低，當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)濃度的樣品也要用相同的方法分析。

 

4、如果樣品都是純品的話可以不經(jīng)過(guò)色譜柱直接進(jìn)樣分析，包括做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品（雖然不建議直接進(jìn)樣分析）。

 

5、如果用的離子源的噴針位置是可移的話，一定要記住做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)其位置，否則其位置移動(dòng)后在相同的條件下進(jìn)入質(zhì)譜的離子流量會(huì)發(fā)生改變，標(biāo)準(zhǔn)曲線就不能使用了！對(duì)于調(diào)用的質(zhì)譜方法不要改動(dòng)shealth gas and aux gas 的流速，否則會(huì)影響進(jìn)入質(zhì)譜的樣品量。

 

6、所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線一個(gè)月后如果想重復(fù)使用，則用QC樣品檢驗(yàn)一下該標(biāo)準(zhǔn)曲線！

 

7、對(duì)于已經(jīng)建立好的分析方法在掃描范圍、流動(dòng)相的組成、梯度或流速等方面不要作任何改動(dòng)，否則，標(biāo)準(zhǔn)曲線要重作。掃描范圍改變目標(biāo)峰的掃描次數(shù)、流動(dòng)相組成改變離子化效率，流速改變色譜峰的保留時(shí)間和峰寬。

 

8、離子阱的強(qiáng)項(xiàng)在于多級(jí)－定性，四級(jí)桿的強(qiáng)項(xiàng)在于定量；

 

9、對(duì)于熱穩(wěn)定性不好的樣品可以通過(guò)提高氣速，降低毛細(xì)管溫度的方法保證定量分析的重復(fù)性；一旦方法固定后不要輕易改動(dòng)。

 

 

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)三：解析圖譜

 

 

解析未知樣的質(zhì)譜圖，大致按以下程序進(jìn)行。

（一）解析分子離子區(qū)

(1) 標(biāo)出各峰的質(zhì)荷比數(shù)，尤其注意高質(zhì)荷比區(qū)的峰。

(2) 識(shí)別分子離子峰。首先在高質(zhì)荷比區(qū)假定分子離子峰，判斷該假定分子離子峰與相鄰碎片離子峰關(guān)系是否合理，然后判斷其是否符合氮律。若二者均相符，可認(rèn)為是分子離子峰。

(3) 分析同位素峰簇的相對(duì)強(qiáng)度比及峰與峰間的Dm值，判斷化合物是否含有Cl、Br、S、Si等元素及F、P、I等無(wú)同位素的元素。

(4) 推導(dǎo)分子式，計(jì)算不飽和度。由高分辨質(zhì)譜儀測(cè)得的精確分子量或由同位素峰簇的相對(duì)強(qiáng)度計(jì)算分子式。若二者均難以實(shí)現(xiàn)時(shí)，則由分子離子峰丟失的碎片及主要碎片離子推導(dǎo)，或與其它方法配合。

(5) 由分子離子峰的相對(duì)強(qiáng)度了解分子結(jié)構(gòu)的信息。分子離子峰的相對(duì)強(qiáng)度由分子的結(jié)構(gòu)所決定，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性大，相對(duì)強(qiáng)度就大。對(duì)于分子量約200的化合物，若分子離子峰為基峰或強(qiáng)蜂，譜圖中碎片離子較少、表明該化合物是高穩(wěn)定性分子，可能為芳烴或稠環(huán)化合物。
例如：萘分子離子峰m／z 128為基峰，蒽醌分子離子峰m／z 208也是基峰。
分子離子峰弱或不出現(xiàn)，化合物可能為多支鏈烴類、醇類、酸類等。

（二）解析碎片離子

(1) 由特征離子峰及丟失的中性碎片了解可能的結(jié)構(gòu)信息。
若質(zhì)譜圖中出現(xiàn)系列CnH2n+1峰，則化合物可能含長(zhǎng)鏈烷基。若出現(xiàn)或部分出現(xiàn)m／z 77，66，65，51，40，39等弱的碎片離子蜂，表明化合物含有苯基。若m／z 91或105為基峰或強(qiáng)峰，表明化合物含有芐基或苯甲酰基。若質(zhì)譜圖中基峰或強(qiáng)峰出現(xiàn)在質(zhì)荷比的中部，而其它碎片離子峰少，則化合物可能由兩部分結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，其間由容易斷裂的弱鍵相連。

(2) 綜合分析以上得到的全部信息，結(jié)合分子式及不飽和度，提出化合物的可能結(jié)構(gòu)。

(3) 分析所推導(dǎo)的可能結(jié)構(gòu)的裂解機(jī)理，看其是否與質(zhì)譜圖相符，確定其結(jié)構(gòu)，并進(jìn)一步解釋質(zhì)譜，或與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較，或與其它譜(1H NMR、13C NMR、IR)配合，確證結(jié)構(gòu)。